1.支原体分离培养 取新鲜清洁中段尿液，接种于支原体培养基，在适宜的培养条件下，支原体易被分离。当发现有菌落生长时，应作同型特异性抗体抑制试验，以作支原体的分型。
2.血清学诊断试验 是诊断支原体感染的实用方法。可用支原体制成抗原，与病人血清作补体结合试验，在疾病后期的血清补体结合抗体滴度比初期升高4倍或以上，有诊断意义。
分子生物学诊断方法 用于临床试验的有MG缺口翻译全基因组DNA探针、UU-rRNA特异的DNA探针及MH-rRNA基因探针等。利用DNA探针进行的核酸印迹试验诊断生殖道支原体感染，其敏感性稍差(56%～63%)，但特异性较高，可鉴别各种支原体甚或种间的生物型。为弥补敏感性的不足，现多开展多聚酶链式反应以帮助诊断。
