凡有肛门周围和会阴部瘙痒者均应考虑蛲虫病的诊断。家庭中曾出现蛲虫感染病例的异位损害患者，应联想存在蛲虫病的可能性，病原学检查查到成虫或虫卵便可确诊。
雌虫会在宿主睡眠，肛门括约肌松弛之时，向下移动到肛门外，在肛门周围及会阴部皮肤产卵。根据此生活习性，在患者入睡后1~3小时，可于肛门、会阴和内衣等处查找成虫，反复检查大多可以明确诊断。
最常用的是棉签拭子法和透明胶纸粘贴法。两种检查方法一般于清晨前进行，连续检查3~5次，检出率可接近100％。
在生理盐水中将消毒棉签浸湿，挤去多余的盐水，于被检者者肛门周围皮肤上进行擦拭。涂抹棉签上的黏附物，至滴加有生理盐水的载玻片上，并加盖玻片镜检。
此检查方法一般于清晨便前采样，采样前不要清洗肛周或外阴部。
裁剪宽＜2.5cm透明胶带纸，等长或稍长于载玻片，且粘贴于载玻片上留作备用。检查时将胶带纸一端揭开，含胶面粘贴肛门周围皮肤，另一面用棉签或手指压迫，使胶面与皮肤充分贴合。再将胶纸重新贴回载玻片上，镜检虫卵。
此检查方法应在清晨受检者大便前进行。
由于雌虫多不在肠道内产卵，所以粪虫卵检出率小于50%。
嗜酸性粒细胞可增高达15％~30％。蛲虫幼虫在体内移行期白细胞总数可增高。
