应根据病史及溃疡的特点，必要时作分泌物涂片、培养、梅毒血清学实验等以明确诊断。

　　对生殖器疱疹行脱落细胞学检查、酶联免疫测定法。

　　对软下疳分泌物涂片检查、分泌物培养、伊东-雷斯特纳(Ito-Reenstieno)反应等可查到病原体。

　　性病性淋巴肉芽肿的辅助检查：血清补体结合试验，稀释16～64倍为阳性;涂片找细胞内包涵体;鸡胚和细胞培养分离衣原体等。

　　梅毒病原体检查，即暗视野检查。在一期梅毒的硬下疳可取少许血清渗出液或淋巴穿刺液放于玻片上，滴加生理盐水后置暗视野显微镜下观察，依据螺旋体强折光性和运动方式进行判断，可以确诊。

　　感染性疾病进行基因诊断：用聚合酶链反应(PCR)诊断生殖器感染具有快速、准确和灵敏度高的特点。

　　软下疳作组织病理检查：软下疳有时同时感染梅毒、性病性淋巴肉芽肿、腹股沟肉芽肿、阴道疱疹等，可检出相应致病微生物。

　　梅毒血清学检查：此类检查主要是检测患者有无抗心质抗体(反应素)存在。密螺旋体抗原血清试验，测定血清特异性抗体。