检查体温、血压、心率等基础体征。听诊肺部是否有呼吸音及啰音。触摸颈部及耳后查看有无淋巴结肿大。
支原体感染的患者可出现白细胞总数正常或略升高，以中性粒细胞升高为主。
起病2周后，约2/3的支原体肺炎患者冷凝集实验阳性。如血清支原体IgM抗体浓度≥1:64，或恢复期抗体浓度有4倍升高，可进一步确诊。由于抗体检查存在滞后性，因此不能单纯以一次抗体阳性作为确诊依据。
是确定诊断支原体肺炎的金标准，直接检测呼吸道中的支原体抗原，可用于早期快速诊断，但其检出率极低，技术条件要求高，所需时间长。
核酸检测技术特异性强、快速、灵敏，可用于早期诊断肺炎支原体肺炎。核酸检查是目前可作为支原体感染确诊的快速诊断方法，可通过采集鼻咽拭子、痰等分泌物进行快速检测。
肺部影像学可用于辅助诊断及预后观察。其影像学主要表现为边缘模糊，密度较低的片状密度影，部分呈网状和结节状间质浸润影，多节段性分布，炎症多在2~3周后吸收。
