此法是生殖器疱疹检查的金标准，敏感性和特异性好，但对实验室条件要求较高，也较费时。医生会从皮损处取一定量的标本，接种在细胞培养基中，通过观察细胞病变来判断结果。生殖器疱疹病毒患者细胞培养HSV阳性。
目前最常用的快速诊断方法，包括直接免疫荧光试验（DIA）、免疫酶染色（IIP）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。生殖器疱疹病毒患者HSV抗原检测为阳性。
检查疱液中有无病毒颗粒，敏感性约10%，但不能与其他病毒区别。临床极少应用。
可用于检测标本中的HSV-DNA，其敏感性和特异性相当于抗原检测，但操作复杂，实验要求较高。
HSV-2型生殖器疱疹病毒患者特异性血清抗体检测阳性。此外，该检查还可用于检测不同HSV型别的血清抗体，可用于复发性生殖器疱疹患者无皮损期的辅助诊断。
但是不同试剂的敏感性和特异性相差较大，该试验检测结果目前不能作为确诊病例的依据。
