用于定性诊断的指标除了测定基础GH和IGF-1外，可行OGTT观察GH谷值水平。此外，研究表明在肢端肥大症活动期血IGF结合蛋白-3（IGFBP-3）升高。

肢端肥大症的定位诊断需借助各种影像学检查：

• 磁共振成像（MRI）作为首选成像模式，MRI禁忌或不可用时进行CT扫描，以观察肿瘤大小和形态，以及鞍旁侵犯情况。
• 在MRI检查未发现垂体腺瘤或术后垂体病理检查为垂体GH细胞增生时，应检查是否可能来自胸部、腹部或盆腔的非垂体瘤引起的生长激素释放激素（GHRH）分泌肿瘤，此时血清GHRH检测有助于定性诊断。
• 由于多数GHRH分泌肿瘤也可表达生长抑素受体，因此采用111铟或123碘标记的奥曲肽显像也有助于诊断GHRH分泌肿瘤。

另外，还需要评估相关的合并症，包括高血压，糖尿病，心血管疾病，骨关节炎和睡眠呼吸暂停，建议行结肠镜、甲状腺超声、垂体激素评估。